Kromatografi iyon değişimi nedir? + Örnek

Kromatografi iyon değişimi nedir? + Örnek
Anonim

Cevap:

Farklı proteinlerin yüklerine ve bağlama özelliklerine dayanarak bir materyale ayırma işlemidir.

Açıklama:

Farklı pH'larda farklı proteinler farklı yükler taşır. Protein karışımını belirlenmiş bir pH değerine yerleştirerek, farklı şarj özelliklerine sahip proteinler içeren bir karışım elde edebilirsiniz.

Bu protein karışımının üzerinde yüklü bir malzeme içeren bir sütuna dökülürse, sütun proteinleri zıt yük içinde bağlar.

Daha sonra proteinleri kolondan ayırmak (işaretini kaldırmak) için farklı miktarlarda iyon içeren farklı çözeltiler kullanabilirsiniz.

Örneğin, belirli bir proteini saflaştırmak istediğiniz proteinlerin bir karışımına sahip olduğunuzu varsayalım. Belirli bir pH'ta ilgilendiğiniz proteinin pozitif olarak yüklendiğini biliyorsanız, karışımı negatif yüklü materyal içeren bir sütuna dökebilirsiniz.

Yük taşımayan veya negatif olarak yüklendiğinde tüm proteinler doğrudan kolonun içinden akacaktır. Ardından, pozitif yüklü proteini, kolondaki negatif yükü tamamlayacak pozitif iyonlarla sütunu doldurarak serbest bırakabilirsiniz. Bu rekabet daha sonra ilgilendiğiniz proteinin uzaklaştırılmasına neden olur.

İşte bunun bir örneği.

Her tepsi farklı konsantrasyonda bir tampon içerir ve 175 mM örnekte görülebileceği gibi (sol üst köşe) çok az kırmızı / kahverengi protein tampondaki iyonlar arasında rekabet olduğu için yüklü zara bağlanmıştır. zar üzerindeki yüklü bağlanma bölgeleri için protein (tampondaki iyonlar "kazandı" çünkü bunlardan daha fazlası var ve bu nedenle proteinin bağlanmasını önlediler). Sağ alttaki örnekte, çok sayıda protein zara bağlanmıştır, çünkü bağlama bölgeleri için rekabet etmek için daha az iyon vardır.

Bu videoda işlem sırasında anyon değiştirme kromatografisini görebilirsiniz: