PCR'de neden negatif kontrol kullanıyoruz?

PCR'de neden negatif kontrol kullanıyoruz?
Anonim

Cevap:

Aşağıya bakınız

Açıklama:

PCR, bir DNA şablonundan ayrılır. Size HIV testi yaptığınızı söyleyelim (HIV bir RNA virüsüdür, ancak bir hücreye girdiğinde, DNA'ya dönüşür … böylece virüslü bir hücrede HIV DNA'sı olur). Kullandığınız primerler, HIV DNA'sının bir kısmına karşılık gelen bir ürün (amplikon) yapar. Bu amplikonu görürseniz, o zaman HIV sekansınız var demektir ….. ama negatif bir kontrolünüz yoksa, kirlenmeniz olabilir.

PCR son derece hassas. PCR'de kullanılan birçok çözüm vardır (su, tampon, dNTP'ler, enzim) … ve hepsi diğer örneklerden, hatta dün yaptığınız reaksiyonda yapılan amplikondan kolayca DNA ile kirlenebilir. Bu nedenle, Hasta X'in DNA örneğine sahipseniz ve HIV'i PCR ile kontrol ediyorsanız, PCR primerleri Hasta X'in DNA örneğindeki (bu kişide HIV varsa) HIV DNA'sından bir ürün yapabilir veya bulaşma. Fakat bunun DNA’daki kontaminasyondan mı yoksa HIV den mi olduğunu söyleyemezsiniz.

Demek su kontrolü yapıyorsun. Tüp 1, reaksiyonun tüm bileşenlerini yerleştirirsiniz ve DNA için sadece su eklersiniz. Bu negatif kontrol. HİÇBİR ŞEY burada büyütülmeli. Tüp 2'ye tüm reaksiyon bileşenlerini ve Hasta X'in DNA'sını koydunuz. Burada bir ürün alırsanız (ve Tüp 1'de hiçbir şey yok), Hasta X muhtemelen DNA'sında HIV DNA'sına sahiptir. Hem Tüp 1 hem de Tüp 2'de bir ürün alırsanız, kontaminasyon probleminiz vardır ve Hasta örneğindeki HIV'in hastalıktan mı yoksa kontaminasyondan mı olduğunu söyleyemezsiniz.

Böylece her zaman bir su kontrolü (DNA yerine su) çalıştırıyorsunuz.