ELISA testinde birincil antikorlar ve ikincil antikorlar ne yapar?

ELISA testinde birincil antikorlar ve ikincil antikorlar ne yapar?
Anonim

Cevap:

Bu, ELISA testinin türüne bağlıdır.

Açıklama:

ELISA = Enzim Bağlantılı İmmünosorbent Testi.

Farklı ELISA analiz tipleri vardır. İhtiyacınız olan şey:

  • ona bağlı bir enzim içeren antikor
  • antikorun bağlandığı antijen
  • ölçülebilir bir reaksiyona neden olan enzimin substratı

enzim antikora ekli olarak sıklıkla HRP (yaban turpu peroksidazı) bulunur. HRP, her ikisi de ölçülebilir olan, rengini değiştiren veya ışık yayan farklı substratlarla reaksiyona girebilir.

Resimde genel bakış farklı şekiller ELISA deneylerinin. Aşağıda nasıl çalıştıklarını açıklayacağım.

Doğrudan ELISA

Bir plaka antijenle (Ag) kaplanır ve birincil antikor enzim ile eklenir. Substrat eklendiğinde, reaksiyon gerçekleşecektir ve antikor-antijen etkileşimlerinin miktarı ile orantılıdır.

Dolaylı ELISA

Yine, bir plaka antijen ile kaplanır ve bir birincil antikor antijene bağlanır. bir sekonder antikor birinci antikora bağlanan ilave edilir. 2. antikor, substrat ile reaksiyona giren enzimi içerir.

Sandviç ELISA

Burada iki veya üç antikor söz konusudur. Plakalara bir yakalama antikoru bağlanır ve antijene bağlanır. Bunu doğrudan (sadece bir antikor) veya dolaylı yöntemle (iki antikor) aynı adım izler.

Rekabetçi ELISA

Bazen ELISA inhibisyonu denir, biraz daha karmaşıktır. Araştırılacak olan antijen ile bir plaka kaplanır. bir birincil antikor enzim ile ilk önce aynı antijenin bilinmeyen bir konsantrasyonuna sahip bir örnekle inkübe edilir. Bu daha sonra plakaya eklenir ve böylece hala serbest olan antikorların plakadaki antijenle reaksiyona girmesine izin verilmez. Numunenin antikor-antijen kompleksleri yıkandıktan sonra substrat eklenir.

Bilinmeyen numune çok fazla antijene sahip olduğunda, plakaya bağlanabilecek serbest antikor daha az olacaktır = düşük sinyal.