Neden GAPDH Western Blot'ta kullanılıyor? + Örnek

Neden GAPDH Western Blot'ta kullanılıyor? + Örnek
Anonim

Cevap:

GAPDH genellikle bir yükleme kontrolü olarak kullanılır.

Açıklama:

Western blotta genellikle GAPDH'yi yükleme kontrolü olarak kullanırız. Bunun anlamı GAPDH'yi araştırmakla, lekenin farklı şeritlerinde yüklü miktarda protein bulunduğunu kontrol edebiliriz.

Kullanım örneği - hücrede belirli bir proteinin yükselmesine neden olduğunu düşündüğümüz bir hastalığımız olduğunu varsayalım. "Sağlıklı" hücrelerden bir örnek ve "hastalıklı" hücrelerden bir örnek oluştururuz. Western blot için her iki numunenin de denk protein miktarlarını bir jele yüklerdik.

İlgilenilen proteimiz için lekeyi araştırdıktan sonra, hastalıklı hücrelerde protein seviyesinin gerçekten yüksek olduğunu (yani lekede daha koyu bir bant olduğunu) bulduk. Proteindeki bu artışın, yükleme artefaktı yerine hücredeki ifadenin değişmesinden kaynaklandığını kanıtlamak (yani, daha içgüdüsel bant, hücrelerde protein ekspresyonundaki bir değişiklikten kaynaklanır, yanlışlıkla bizim yüklemekten değil "hastalık" örneğinden "sağlıklı" olandan), ayrıca GAPDH için leke de toplam protein seviyelerinin her iki şeritte aynı olduğunu göstermesini isteriz.

Dolayısıyla, bunu yaparak, eşdeğer proteinin iki şeride yüklendiğini ve gözlemlediğimiz bant yoğunluğundaki değişimin ilgilenilen protein için protein ifadesindeki değişikliklerden kaynaklandığını gösteriyoruz.