Western blot neden elisa'yı onaylamak için kullanılıyor? + Örnek

Western blot neden elisa'yı onaylamak için kullanılıyor? + Örnek
Anonim

Cevap:

Tipik olarak bu bir antikor özgüllük testidir.

Açıklama:

Bir ELISA'da, antikorunuzun ilgilendiğiniz proteine, tamamen farklı bir proteine veya bir dizi proteine bağlanıp bağlanmadığını söylemek çok zordur.

Western lekesi, antikorun özgüllüğünü kontrol etmek için kullanılacaktır (Western lekesinin yanlış proteinlerle yapılan tüm çapraz reaksiyonları tespit edemeyebileceğine dikkat etmelisiniz).

Western blot'ta, antikorun bağlandığı proteinin boyutunu görebilirsiniz (bir ELISA'da olamaz). Bu nedenle, örneğin, antikorunuzun 56 kDa'lık bir proteine bağlanması gerekiyorsa ve leke üzerinde ~ 56 kDa'da bir bant görüyorsanız, antikorun doğru proteine bağlandığından emin olabilirsiniz.

Öte yandan, 32 kDa'da bir bant gördüyseniz, antikorun yanlış proteine bağlandığı sonucuna varabilirsiniz. Aynı şekilde, eğer Western blotta birçok bant ortaya çıkarsa, o zaman (protein bozunması olmadığında), antikorun bir dizi farklı proteine bağlandığını gösterir.

Jelin üzerinde görünen 32 kDa bandının ve aynı zamanda çoklu bantların örneğinde, antikorun ELISA için spesifikliği bulunmadığını ve ELISA'da görülen herhangi bir sonucun, ilgilenilen proteine spesifik olmayabileceğini düşündürecektir.

Eğer bu tür bir test yapılırsa, antikoru test etmek için bir çeşit "müdahale edici" reaktif içerebilir. Örneğin, antikorumu bir peptide yükseltmiş olsaydım, doğru bağlanmayı test etmek için birincil antikor çözeltisine peptit içerebilir. Yani, peptid varlığında, birincil antikorum fazla bir peptit varlığına bağlı olarak bağlanamadığından birincil antikorum bağlanamadığı için ELISA'dan hiçbir bant görmemeli veya sonuç görmemeliyim.