Protein saflaştırması sırasında neden lizis basamaklarında DNaz ve lizozim kullanılır?

Protein saflaştırması sırasında neden lizis basamaklarında DNaz ve lizozim kullanılır?
Anonim

Cevap:

Protein Fraksiyonunu saflaştırmak için …

Açıklama:

Bir (genellikle spesifik) bir proteini saflaştırıyorsanız, bunlara bağlı olabilecek kadar çöpten kurtulmanız gerekir.

Hangi proteinin peşinde olduğunuza bağlıdır, ancak genellikle, özellikle de hazırlayıcı arıtma, mümkün olduğunca fazla safsızlıktan kurtulmak için.

1:

Proteinler genellikle büyük olduğundan ve sonuçta (ultrasantrifüjlenmiş) fraksiyonunuzun alt bantlarında ortaya çıkacağından, özellikle de saflaştırdığınız protein, benzerleri ile ilgili ise, herhangi bir nükleid asitten kurtulmak istersiniz. Pol1, Ters transkriptaz veya Replikasyon / Transkripsiyon / Tercüme ile ilgili diğer enzimler..

Örnekte mevcut olan Nükleik asitleri bir DNAz kullanarak ayırabilirsiniz: bu, DNA'yı kurucu kısımlarına tamamen hidrolize eder.

Dikkat edin, hepsi kendi mekanizmaları ve substratları için özgüllükleri bakımından farklı olan çeşitli DNAzlar vardır. Kullanılan DNAz bağlı olarak, ya gösterebilir Endo- veya Ekzo- nükleaz aktivitesi …

Daha doğrusu RNAz RNA genellikle proteinlerin yüzdürme / kesir aralığında daha fazla olduğundan ve proteine bağlanabileceğinden daha uygundur.

2:

Lizozim: En az iki işlevi olan bir enzim:

Enzimleri glikosile eder: Kan dolaşımında taşınan proteinlerin çoğu Glikosiledir: onlara bağlı birkaç şeker molekülüne sahiptir. Lizozim, şeker artıklarını giderir.

Ayrıca Gram-Positive bakterilerin hücre duvarını parçalama kapasitesine sahiptir, lyse. (Gram pozitif bakterilerden protein saflaştırmak istiyorsanız)

Herhangi bir bozulmuş ürün, nükleik asit veya şeker kalıntısı, "daha hafif" yüzdürme kabiliyetlerinden dolayı Santrifüj Tüpünün üst kısımlarında görünecektir.